流式熒光法（Flow Cytometry）在檢測細(xì)胞因子時，為了定量分析細(xì)胞因子的濃度，通常需要建立一個標(biāo)準(zhǔn)曲線，該曲線是通過測量一系列已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品（通常是純化的細(xì)胞因子）的熒光強(qiáng)度來建立的。選擇合適的擬合模型可以確保標(biāo)準(zhǔn)曲線的準(zhǔn)確性。然而在，流式熒光法中，細(xì)胞因子的濃度與熒光強(qiáng)度之間的關(guān)系往往是非線性的。這種非線性關(guān)系通常表現(xiàn)為S形曲線，即隨著濃度的增加，熒光強(qiáng)度的增加速度會發(fā)生變化。常規(guī)的線性擬合無法準(zhǔn)確描述這種非線性關(guān)系。目前大多數(shù)流式分析軟件采用的是五參數(shù)邏輯回歸（5PL），尤其是在使用流式熒光法等技術(shù)進(jìn)行免疫檢測時。5PL模型比夠更靈活地?cái)M合數(shù)據(jù)，尤其是在數(shù)據(jù)呈現(xiàn)非對稱或非典型S形曲線的情況下。目前有很多流式分析軟件（如FCAP)，都是采用這樣擬合的方法做標(biāo)準(zhǔn)曲線。當(dāng)有些場景沒辦法用軟件計(jì)算時，該怎樣做？下面我們來介紹如何使用origin軟件的五參數(shù)邏輯回歸擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1 在originPro軟件中輸入數(shù)據(jù)，X為濃度，Y為熒光強(qiáng)度

2 分析-擬合-非線性曲線擬合-打開對話框

3 對話框中 函數(shù)選擇 Logistic，然后進(jìn)行擬合

4 得到一系列分析數(shù)據(jù)后，找到擬合曲線圖，并雙擊

5 雙擊后得到一個不怎么好看的曲線

6 將擬合曲線的X軸和Y軸都設(shè)置成log10

7 最后得到一條比較絲滑的，R的平方>0.99的標(biāo)曲（在這里我們用到了5個濃度梯度做標(biāo)曲，實(shí)際上用設(shè)置更多的濃度梯度會更好）。

8 在后續(xù)檢測中測到的熒光可以代入到標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合的公式中計(jì)算出靶標(biāo)濃度。

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